Preparando Rojo Ponceau

Como sabéis (o espero que aprendáis), el rojo Ponceau es el reactivo más utilizado para la tinción reversible de las proteínas en una membrana, aunque tiene el inconveniente de que su sensibilidad es limitada. Se prepara así:

ROJO PONCEAU

Ponceau  0.01%

Acido acético  0.1%

Disolver 0.5 g de Ponceau S en 1 ml de ácido acético glacial. Llevar hasta 100 ml con H₂O.

Preparando disoluciones de cloruro sódico 3M y 5M

Así de fácil:

NaCl  3M

8.767 g/50 ml

NaCl  5M

14.61 g/50 ml     

Recordad que no es para cocinar, así que autoclavar para disolver bien la sal.

EDTA 0.5 M pH=8.0

EDTA  0.5 M  pH=8.0  (ETILEN DIAMINO TETRAACÉTICO)

19.01 g/100 ml

Ajustar el pH con ácido acético.

Preparando denhardt 50x y 100x

DENHARDT 50X

Ficoll 400    -----------------------------    5 g

Polivinilpirrolidona   -------------------    5 g

BSA   ------------------------------------    5 g

H₂O  cantidad suficiente para  -------   500 ml

Filtrar para esterilizar y guardar a -20ºC en alicuotas de 25 ml.

 

DENHARDT 100X

Ficoll 400 ----------------------------- 10 g

Polivinilpirrolidona ------------------- 10 g

BSA ------------------------------------ 10 g

H₂O cantidad suficiente para ------- 500 ml

Filtrar para esterilizar y guardar a -20ºCen alicuotas de 25 ml

Preparando citrato fosfato pH=5

CITRATO FOSFATO  pH=5

A:   Acido cítrico  0.1 M   (4.2 g/200 ml)

B:   Na₂HPO₄  0.20 M  (14.3g/200 ml)

24.3 ml de A + 25.70 ml de B + 50 ml H₂O

Preparando blotto

Algo sencillo esta vez: los mil y un usos dela leche desnatada:

BLOTTO

5% leche desnatada disuelta en PBS-Tween 20.

Gel de secuenciación

GEL DE SECUENCIACIÓN

                                                 500  ml

Urea     ------------------------     225 g

Acrilamida     -----------------      28.75  g

Bisacrilamida      -------------        1.25 g

TBE (10X)     -----------------     50 ml

Agua cantidad suficiente para 500 ml.